◆ Western Blot检测                                             办事编号：FW01

一、办事内容

1、从植物细胞、人或植物构造、细菌、动物等样品中提取卵白，重组卵白、血清、培育上清等样品

2、对样品中卵白举行半定量剖析

3、Western blot检测

（1） 电泳：聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分散卵白样品

（2） 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）

（3） 杂交：用抗体判定膜上的特定卵白（INCUBATION: Antibody）

（4） 化学发光检测（ECL），胶片曝光，TotalLab Quant软件读取IOD值（可选）

4、预实行及正式实行办事：协助客户设计样品上样次序以切合论文宣布要求

5、收费举行卵白内参检测（一切内参抗体均收费提供）

二、样品要求

1、细胞＞1×10⁷；构造＞30mg；细菌湿重＞1mg；动物＞100mg；血清＞50ul；等

2、样品卵白浓度＞1mg/ml，卵白量＞200ug/样品

三、免费尺度

四、客户提供质料

1、奇怪或准确保管的样品（依照九游会的要求提供）

2、目标卵白一抗：九游会可以给客户收费提供抗体查找办事

3、阳性比较样品（只管即便提供）

4、相干文献（可选）

五、提交给客户后果

1、预实行曝光后果（胶片及扫描图），预实行接纳3个一抗浓缩度

2、正式实行曝光后果（胶片及扫描图）

3、完备实行陈诉

4、IOD值剖析陈诉（可选）

六、办事项目阐明

客户要求加可曝光marker的，需事前阐明，并依照可曝光项目免费

1、提供的卵白量与目标待检测的卵白数目有关，卵白数目增长响应的样品量也要增长

2、胞浆、胞核卵白抽提样品泉源为：哺乳植物细胞、植物构造。假如1个样品辨别提取胞浆、胞核卵白后，卵白定量时以2个样品盘算

3、每张膜样品数目为1-8个，不敷8个以8个收取。9-16个样品为2张膜，17-24个样品为3张膜；以此类推

举例：7个样品，1个目标卵白，算1张膜；有9个样品，1个目标卵白，算2张膜

      7个样品，2个目标卵白，算2张膜，有9个样品，2个目标卵白，算4张膜

以上为一样平常算法。假如客户样品数目必要依照组别等来举行上样时必要重新确定每张膜的上样量及膜的张数

4、选择局部样品举行预实行，参考目标卵白一抗阐明书举行3个浓缩度的预实行

5、向客户反应预实行后果，等候客户确认预实行后果后确定能否举行正式实行

6、请您提供质量包管的一抗（或委托九游会代购）。抗体的利用量经过预实行落伍行确认，一样平常不接纳利用一抗

7、假如必要对膜上目标卵白举行抗体剥离（洗脱大概 stripping）的，请提早阐明

8、发起提供目标卵白阳性表达样品（纯卵白、有阳性表达的细胞或构造、商品化的阳性比较产品等）作为阳性比较

9、收费内参检测为：beta-actin，beta-tubulin，GAPDH，Histone H3， Lamin B1等

10、如需进一步数据剖析：TotalLab Quant专业软件读取IOD值、条带的Normalization处置、以及宣布论文时所用条带的处置，请另询价

11、对条带后果有特别要求，请另询价

12、两边签署条约后，收取70%首付后启动预实行

13、WB特别要求请征询