◆ 荧光定量PCR（RT-qPCR）检测（含内参）                         办事编号：FW04

一、荧光定量PCR原理简介

及时荧光定量PCR是使用荧光染料（具有双链DNA亲和性）或荧光标志短核苷酸探针（使用Taq酶的5’→3’外切酶活性）的荧光活性，在PCR 反响的的历程中，每个循环搜集一个荧光强度信号。随着PCR 反响产品量的增长，荧光信号强度也等比例加强。RT-qPCR反响完成后经过对PCR 扩增反响中每一个循环后荧光信号强度变革的监测可失掉一条荧光扩增曲线图，进一步可盘算出绝对应的产品量的变革，从而完成对肇始模板定量及定性的剖析。

二、办事内容

1、从植物细胞、人或植物构造、细菌、动物、血清、泥土等样品中提取核酸

2、对核酸举行浓度及纯度剖析

3、荧光定量PCR检测

（1） 引物和探针的设计与分解

（2） 相对定量和绝对定量的选择

（3） 探针法和染料法的选择

（4） 荧光定量PCR仪对目标基因的检测

（5） 数据统计和剖析

4、预实行办事：依据客户提供的目标基因序列或NCBI序列号提供客户引物和探针，并挑选出最优化的引物和探针。

5、正式实行办事：依据预实行挑选的引物和探针对所用样品举行荧光定量PCR的检测，并对后果举行统计和剖析。

5、收费举行绝对荧光定量PCR内参基因的检测

三、样品要求（样品处置及保管见附件）

1、细胞＞1×10⁶；构造＞50 mg；细菌湿重＞50 mg；动物＞100 mg；血清＞50 µl；泥土干重＞200 mg

2、样品卵白浓度＞1 mg/ml，卵白量＞200 µg/样品

四、免费尺度

四、客户提供质料

1、奇怪或准确保管的样品（-80保管或参加Trizol后-20保管）

2、目标基因序列或NCBI序列号

3、阳性比较样品（只管即便提供）

4、相干文献（可选）

五、提交给客户后果

1、预实行引物挑选后果（相反样品差别引物消融曲线图）

2、正式实行后果（所用样品消融曲线图，Ct值，拷贝数（相对定量），扩增服从，尺度曲线（相对定量），尺度品格粒和菌株（相对定量），样品统计剖析后果）

3、引物，探针及其序列

4、完备实行陈诉

六、办事项目阐明

1、选择局部样品举行预实行，参考目标基因2-3个引物举行预实行；

2、向客户反应预实行后果，等候客户确认预实行后果后确定能否举行正式实行

3、请您提供准确的基因序列或NCBI序列号以供引物设计和探针设计，也可以依据客户提供的引物和探针序列间接分解落伍行实行。引物由九游会收费举行分解，探针分解的用度请参照“免费尺度”

4、发起提供目标基因阳性表达样品（DNA，cDNA、有阳性表达的细胞或构造、商品化的阳性比较产品等）作为阳性比较。阴性比较如无特别阐明均为无模板比较

5、收费内参检测为：beta-actin，beta-tubulin，gapdh，假如必要别的基因作为内参必要提早阐明并按样品数量收取用度，参照“免费尺度”

6、两边签署条约后，收取70%首付后启动预实行

7、荧光定量PCR特别要求请征询