◆ 免疫沉淀及免疫共沉淀 （Immunoprecipitation，IP及Co-IP）        办事编号：FW03

一、办事内容

1、平和条件下举行卵白抽提，BCA定量，调解卵白浓度

2、样品预处置：用Protein A/G Sepharose孵育（举行WB验证可以免此步调）

3、样品与IP抗体举行孵育，之后参加Protein A/G-Agarose举行孵育

4、洗濯Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并对免疫复合物举行变性处置

5、沉淀产品SDS—PAGE大概WB判定，质谱判定由客户自行确定

6、Western blot检测

（1） 电泳：聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分散卵白样品

（2） 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）

（3） 杂交：用抗体判定膜上的特定卵白（INCUBATION: Antibody）

（4） 化学发光检测（ECL），胶片曝光

7、预实行及正式实行办事

二、样品要求（样品处置及保管见附件）

1. 细胞＞1×10⁷；构造＞100mg；细菌湿重＞1mg；动物＞100mg；血清＞50ul

2. 样品卵白浓度＞1mg/ml，卵白量＞200ug/样品

三、免费尺度

四、客户提供质料

1、奇怪或准确保管的样品

2、目标卵白一抗，空缺大概阴性同种属IgG

3、阳性比较样品（只管即便提供）

4、相干文献（可选）

五、提交给客户后果

1、预实行曝光后果（胶片及扫描图），预实行接纳2个一抗浓缩度

2、正式实行曝光后果（胶片及扫描图）

3、完备实行陈诉

4、IOD值剖析陈诉（可选）

六、办事阐明

1、待检测样品可以是待检测卵白样品，也可以是细胞、构造等其他样品

2、免疫沉淀用抗体

3、检测用抗体

4、特异性二抗

七、比较设置：由客户提供

1、空缺：无抗体，只要protein A/G

2、阴性比较：无卵白，有抗体及protein A/G

3、阴性比较：未转染细胞大概基因敲除样品

4、对应的有关空缺抗体: Normal IgG

5、卵白裂解液上清：Input