◆ChIP检测（Chromatin Immunoprecipitation， ChIP）         办事编号：FW02

第一局部：抗体IP验证

◆ 免疫沉淀(Immunoprecipitation，IP)

办事内容

1. 平和条件下举行卵白抽提，BCA定量，调解卵白浓度

2. 样品预处置：用Protein A/G Sepharose孵育

3. 样品与IP抗体举行孵育

4. 洗濯Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并对免疫复合物举行变性处置

5. 沉淀产品SDS-PAGE大概WB判定（现在暂不提供另外判定）

6. Western blot检测

（1） 电泳：聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）分散卵白样品

（2） 湿法转印（BLOTING：Tank Transfer）

（3） 杂交：用抗体判定膜上的特定卵白（INCUBATION: Antibody）

（4） 化学发光检测（ECL），胶片曝光，TotalLab Quant软件读取IOD值（可选）

样品要求（样品处置及保管见附件）

1. 细胞＞1×10⁷；构造＞30mg；细菌湿重＞50mg；动物＞100mg；血清＞50ul

2. 样品卵白浓度＞1mg/ml，卵白量＞500ug/样品

免费尺度

客户提供质料

1、 奇怪或准确保管的样品

2、 目标卵白一抗

3、 阳性比较样品（只管即便提供）

4、 相干文献（可选）

提交给客户后果

1、预实行曝光后果（胶片及扫描图），预实行接纳2个一抗浓缩度

2、正式实行曝光后果（胶片及扫描图）

3、完备实行陈诉

4、IOD值剖析陈诉（可选）

5、抗体能否可以实用于IP是举行ChIP的条件

办事阐明

1. 待检测样品可以是待检测卵白样品，也可以是细胞、构造等其他样品；

2. 免疫沉淀用抗体；

3. 检测用抗体;

4. 特异性二抗由天德悦（北京）生物科技有限责任公司提供;

5. IP检测可以不举行，但不克不及包管后续实行的后果。

比较设置

1、 空缺：无抗体，只要protein A/G

2、 阴性比较：无卵白，有抗体及protein A/G

3、 阴性比较：未转染细胞大概基因敲除样品

4、 有关空缺抗体

5、卵白裂解液上清：Input

第二局部

◆ 染色质免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）

办事内容

1. 样品甲醛交联牢固、停止、搜集样品、裂解样品

2. 超声大概酶解处置样品DNA成片断，琼脂糖电泳检测

3. 样品预处置：用Protein A/G Sepharose孵育

4. 样品与IP抗体举行孵育

5. 洗濯Protein A/G Sepharose-Antibody-Protein Complex，并对免疫复合物举行变性处置，提取DNA样品

6. 检测

（1） 及时荧光定量PCR检测（最常用，收费检测）

（2） DNA芯片检测（必要联系测试厂家，必要另付费。询价）

（3） DNA产品测序（必要联系测试厂家，必要另付费。询价）

免费尺度

客户提供质料

1、奇怪或准确保管的样品

2、目标卵白一抗，空缺大概阴性同种属IgG

3、阳性比较样品（只管即便提供）

4、ChIP检测试剂盒